Page 52 - Revista Científica Biofar
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BIOFAR – CIENTIFICA
oscura del recipiente, cubriendo y dejando que no estén juntas para evitar una auto
por 24 horas de acuerdo a protocolos del inhibición, se sellaron con papel parafilm
laboratorio PROFAC - CTA-UMSS. para evitar que se evapore el agua y posterior
Se preparó diluciones de los extractos en se incuban en lugar atemperado a una
concentraciones de 1000 ppm. 500 ppm. 100 temperatura de 20 – 25 °C en presencia de
ppm por triplicado a partir de los extractos luz natural o artificial. Las semillas pre
concentrados, también se preparó los germinadas pasadas las 24 horas, son las que
controles negativos. (Agua de mar y se utilizan para el ensayo de inhibición.
DMSO). Se preparó diluciones de los extractos en
Una vez eclosionadas las artemias, se concentraciones de 1000 ppm. 500 ppm. 100
procede a contar en un número de diez (por ppm por triplicado a partir de los extractos
triplicado) colocando en viales en contacto concentrados. También se preparó los
con las diluciones preparadas de los controles negativos. (Agua de mar y
extractos por un tiempo de 24 horas. DMSO).
Pasado las 24 horas del contacto (extractos- Las semillas pre germinadas, se pusieron en
artemias) se realizó el conteo de las Artemias una cantidad de 7 a 10 unidades sobre el
vivas y muertas comenzando por los papel filtro contenidos en cajas Petri que
controles negativos (Agua de mar y DMSO). poseen las diluciones de los extractos y que
Determinación de dosis Letal Media son sellados con parafilm para evitar la
(DL50). pérdida de humedad. Las cajas son
Con el resultado del conteo de Artemias se incubadas nuevamente a temperatura de 20
procedió a determinar la dosis letal media – 25 °C en presencia de luz natural o
(DL50), llevando los datos a un programa artificial por 72 horas.
estadístico computarizado “Finney” con el Pasado este tiempo se midió la longitud de
siguiente criterio de actividad. las raíces desarrolladas comenzando con los
controles negativos agua de mar, DMSO,
DL50 inferior a 1000 ppm = sustancia tóxica control positivo (Zinc) y posteriormente los
DL50 superior a 1000 ppm = sustancia no extractos.
tóxica Con los datos obtenidos de la prueba, se
determinó la Concentración Inhibitoria
Ensayo de inhibición de germinación de media (CI50) por el programa Excel, donde
semillas de lechuga prueba citostatica. se calculó el % de crecimiento y el % de
Para este ensayo se utilizó método descrito inhibición. Posteriormente se realiza una
por el PROFAC - CTA-UMSS regresión lineal que calcula el IC 50 de
Se realizó una pre germinación de las acuerdo a protocolos estandarizados en el
semillas de lechuga en recipientes limpios y laboratorio PROFAC - CTA, para clasificar
humedecidos que contenía papel filtro, se a la sustancia según el siguiente criterio:
esparció unas 50 a 100 semillas cuidando
IC50 superior a 1000 ppm ——- Sustancia No inhibitoria
IC50 entre 1000 y 100 ppm ——- Sustancia medianamente inhibitoria
IC50 entre 100 y 10 ppm ——- Sustancia Inhibitoria
IC50 menor a 10 ppm ——-Sustancia muy inhibitoria
RESULTADOS Los resultados obtenidos por análisis
fitoquimico para la determinación
Determinación de metabolitos secun- metabolitos secundarios en los extractos
darios por marchas fitoquímicas etanolicos se muestran en la Tabla 2.
