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una muestra de biopsias y la histopatología
que es un método con buenos resultados; en
la actualidad en varios laboratorios se está
implementando la técnica de reacción en
cadena de la polimerasa (PCR)
El diagnóstico por PCR para detectar
directamente H. pylori en muestras clínicas
provee una sensibilidad tan alta como el
cultivo para la detección de la infección (12) . El fundamento de la prueba rápida de la
Este método puede ser realizado mediante la
amplificación de genes esenciales y de
virulencia. Los genes esenciales están
presentes en todas las cepas y definen el y amoniaco, lo cual genera un pH básico que
estatus de la infección como glmM que
codifica para la enzima fosfoglucosamina
mutasa (13) y ureA de la ureasa A (14) . Así fuerte debido a la acción del indicador de
mismo, el gen ARN ribosomal 16S ha sido
y es ampliamente usado en estudios
taxonómicos y filogenéticos para la
detección e identificación de especies del
género Helicobacter .
(15)
El objetivo principal de este estudio fue colocó la biopsia de Antro gástrico en el test
implementar una técnica molecular para la
detección de Helicobacter pylori,
identificando los genes ARN16S y glmM,
comparando con el test de la ureasa,
utilizado frecuentemente por los médicos
gastroentrólogos durante la endoscopia.
MATERIALES Y METODOS.
En el presente estudio se trabajó con un total
de 215 biopsias de pacientes que se
realizaron endoscopias en la Clínica los
Olivos de la ciudad de Cochabamba en los
meses de septiembre a diciembre de año
2015.
Se obtuvo un consentimiento informado de
los pacientes y se llenó un formulario
diseñado para la obtención de datos,
considerando la edad, el sexo, la
disponibilidad de agua potable, lugar de
alimentación, el diagnóstico clínico y
endoscópico.
De cada paciente que aceptaba participar en
el proyecto, se obtuvo dos biopsias gástricas
del antro. Una para la prueba de la ureasa y
la otra para la identificación molecular.
La biopsia para la prueba molecular fue
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BIOFAR – CIENTIFICA
colocada en un tubo eppendorf y llevada en
cadena de frio al laboratorio para la
extracción posterior de ADN.
Prueba dela ureasa.
El test de ureasa se realizó en la sala de
endoscopia de la Clínica Los Olivos para lo
cual se utilizó el test de la marca
HelicotecUT Plus.
®
ureasa consiste en detectar la presencia de la
enzima de la siguiente forma: H. pylori
descompone la urea en anhídrido carbónico
va a ponerse en evidencia mediante el
cambio de color del medio de amarillo a rosa
pH.
Esta prueba de la ureasa rápida se realizó
directamente con la muestra de biopsia
gástrica (región de Antro), obtenida
mediante la endoscopia digestiva alta. Se
de ureasa y se esperó 24 horas para dar un
resultado definitivo.
Se consideró Positivo: Cuando se observa
cambio de color a rosado.
Se consideró Negativo: Cuando no se
visualice cambio de color.
PCR múltiple para la identificación de
Helicobacter pylori.
Extracción de ADN.
La extracción de ADN, se realizó utilizando
el Kit FAVORGEN, las biopsias fueron
trozadas sobre un portaobjetos con la ayuda
de un bisturí; la extracción se realizó
siguiendo las instrucciones del fabricante,
para la conservación de ADN se utilizó agua
de alta pureza.
Para verificar la presencia de ADN, se realizó
la cuantificación utilizando un fluorometro
R
QUBIT 2.0.
Reacción en cadena de la polimerasa.
Identificación de Helicobacter pylori por
Multiplex PCR.
Para detectar a Helicobacter pylori en el
ADN obtenido de biopsias gástricas se
utilizó como marcadores el gen ARN 16s y
el glmM, utilizado en estudios de otros
países (16,17) .