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BIOFAR – CIENTIFICA
Se utilizaron los cebadores descritos en la Helicobacter pilory ATCC 43504, Control
tabla 1 y los tamaños de los productos de - : E. coli 35218
amplificación obtenidos fueron para los Las condiciones finales fueron:
o
genes ARN 16S y glm M fueron de 502 y 294 desnaturalización inicial 94 C por 5 minutos,
o
pb respectivamente. 35 ciclos de desnaturalización a 94 C por 1
Para la identificación simultanea de ambos minuto, hibridación a 56 C; por 1 minuto,
o
o
genes se adecuó una PCR múltiple, se elongación a 72 C por 1 minuto y una
hicieron varias pruebas para obtener un elongación final a 72 C por 10 minutos. Esta
o
protocolo estandarizado, se estableció una amplificación se llevó a cabo en un
temperatura óptima de hibridación y se termociclador marca BIORAD.
fueron variando las concentraciones de Una vez realizada la PCR, se realizó
Cloruro de magnesio, dNTPs, y volumen de electroforesis con el fin de separar los
ADN, hasta lograr una amplificación sin productos obtenidos, utilizando un gel de
bandas inespecíficas observadas agarosa a 1,2%, una fuente de poder marca
inicialmente debido al ADN propio del BIORAD, y una cámara de electroforesis de
paciente. la misma marca.
Se utilizó buffer, 1x, MgCl 1,5 mM; dNTPs Para la visualización el gel se colocó en una
2
200uM; cebadores 0,5uM de cada uno, taq solución de bromuro de etidio a una
polimerasa 1 U por reacción y 3 ul de ADN. concentración de 0,5ug/ml. Y
La secuencia de los cebadores utilizados se posteriormente se observó en un
encuentra en la tabla 1. transiluminador de luz ultravioleta marca
Como Control +, se utilizó el ADN de BIORAD.

Tabla 1. Secuencia de cebadores utilizados para el diagnóstico de Helicobacter pylori

Cebador Secuencia Tamaño Temperatura
en pb de hibridación
ARN 16s (F:5 '–GCGCAATCAGCGTCAGGTAATG-3 ') 502 56 ºC

R: 5 '- GCTAAGAGAGCAGCCTATGTCC-3
GlmM F: 5 '- AAGCTTTTAGGGGTGTTAGGGGTTT-3') 294 56 ºC
R: 5 '- AAGCTTACTTTCTAACACTAACGC-3

Análisis estadístico. y la identificación molecular del gen ARN
Con los resultados obtenidos se elaboraron 16s y el gen glmM en una prueba de PCR
tablas de frecuencia y otras para la múltiple que fue estandarizada para la
interpretación correcta de los resultados, se optimización de los resultados; obteniendo
utilizaron tablas de contingencia para la productos de amplificación de 502pb para el
obtención de chi cuadrado, utilizando el gen ARNr16s y 294pb para el gen glmM;
programa estadístico SPSS. Los resultados de la amplificación se
observan en la figura 1.
RESULTADOS

La presencia de Helicobacter pylori se
determinó por dos métodos, el test de ureasa,