Page 63 - Revista Científica Biofar
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Evaluación de la citotoxicidad por Posteriormente se realizó el repique de 2 a 3
bioensayo en Artemia salina colonias de las cepas a un tubo falcón que
Esta prueba nos permite determinar la contiene 5 ml de caldo nutritivo TSB
actividad biológica de un extracto en (Tryptic Soy Broth) y posteriormente se
nauplios del crustáceo de Artemia salina, incubo en una estufa a temperatura de 37°C
que es altamente sensible a una gran por 24 horas.
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variedad de sustancias químicas . Preparación de agar para test de sensibilidad
Para este procedimiento se preparó una Este procedimiento fue realizado de acuerdo
solución de sal marina al 3.8%, la siembra a las indicaciones del inserto donde indica
de los huevos se realizó en una cantidad de pesar 40 g. de medio TSA para un litro de
100 mg de Artemia salina en recipientes agua. Se llevó a autoclave para esterilizar a
oscuros en un sitio definido atemperado 121 °C por 15 minutos en un equipo de la
entre 20 – 25 °C e iluminado. El depósito de marca RAYPA.
los huevos se lo realiza en la parte oscura, se Se colocó una cantidad de 10 ml de agar
tapa y se deja por 24 horas de acuerdo a estéril en cada caja petri, operación realizada
protocolos del laboratorio PROFAC. por triplicado para cada cepa bacteriana.
Se preparó diluciones de los extractos a La segunda capa fue preparada de la misma
concentraciones de 1000 ppm. 500 ppm. 100 manera con la variante que esta contiene 1
ppm por triplicado a partir de los extractos ml de la suspensión bacteriana, la cual fue
concentrados, también se preparó los añadida a cada caja petri que contenía la
controles negativos. (Agua de mar y DMSO). capa base de TSA. Luego del solidificado se
Pasado las 24 horas del contacto (extracto efectuó cinco pocillos en cada caja petri con
dilución-Artemias) se hace el conteo de las la ayuda de un saca bocados.
Artemias vivas y muertas comenzando por Adición de los extractos.
los controles negativos (Agua de mar y Una vez concluido la preparación de las
DMSO). placas se procedió adicionar los extractos
Determinación de dosis Letal Media etanolicos e hidroalcohólicos de las hojas de
(DL50). moringa a los pocillos, comenzando por
Con el resultado del conteo de Artemias se extracto puro y sus diferentes diluciones más
procedió a determinar la dosis letal media controles positivos (Gentamicina,
(DL50), utilizando un programa estadístico Ampicilina) y negativos (agua destilada
computarizado Finney con el siguiente estéril). Diluciones de trabajo 1/2 - 1/4 - 1/8
criterio de actividad. - 1/16 - 1/32 - 1/64 - 1/128.
DL50 inferior a 1000 ppm = sustancia tóxica Terminado este procedimiento se llevó a la
DL50 superior a 1000 ppm = sustancia no estufa de cultivo a temperatura de 37°C por
tóxica un periodo de 18 a 24 horas en la misma
Pruebas de sensibilidad antimicrobiana – posición en la cual se adiciono los extractos
C.I.M. por tratarse de una prueba de sensibilidad
Para el desarrollo y determinación de la por difusión.
actividad antimicrobiana y CIM, se procedió Observación y medición de los halos de
a realizar de la siguiente manera: inhibición y actividad antibacteriana
Preparación de cepas Bacterianas e inoculo Culminado el periodo de incubación se
de Escherichia coli , Staphylococcus realizó la observación y medición de los
áureus halos de inhibición con la ayuda de un pie
Se descongelaron las cepas bacterianas y se de rey para determinar la actividad
realizó el sembrado en placas petri que antibacteriana del extracto y sus diluciones
contenía medio TSA (Tripteina Soya Agar) en relación a los controles positivos.
y se trasladó a una estufa a 37°C por un
tiempo de 24 horas.
