Page 64 - Revista Científica Biofar
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BIOFAR – CIENTIFICA
Determinación de la actividad Se preparó el control positivo a
antioxidante por el método DPPH concentraciones de 1000ppm, 800 ppm,
El estudio de la actividad antioxidante se 600ppm, 400ppm, 200 ppm, 100ppm,
llevó a cabo mediante el método químico 50ppm, 25ppm, 12.5ppm utilizando como
DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo), solvente agua. Para realizar la lectura del
método desarrollado por Brand-Williams en control positivo se utilizó 2 ml de la solución
1995, el cual contiene un radical de color de DPPH 0.1 mM más 50 µl de las
azul violeta, que va decolorándose hacia diluciones preparadas anteriormente de
amarillo pálido por la reacción con una Vitamina C. Se dejó en reposo por un
sustancia antioxidante, siendo medido periodo de 30 minutos protegido de la luz,
espectrofotométricamente a 517 nm. de posteriormente se realizó la lectura de las
longitud de onda. (4) absorbancias a 517 nm de longitud de onda
Curva de calibración en el espectrofotómetro THERMO
Se preparó una solución de DPPH de SCIENTIFIC. Se utilizó como blanco agua
concentración 1mM (Proveedor: SIGMA), estéril.
en etanol absoluto como solución stock. De Lectura de las muestras de Moringa
esta solución se preparó una dilución inicial Se preparó una solución madre para cada
de 0.1mM en etanol absoluto. extracto con la ayuda del cálculo de los
A partir de la concentración 0,1mM se sólidos totales a una concentración de 1000
procedió a realizar una curva de calibración ppm y sus respectivas diluciones hasta 12,5
del reactivo a concentraciones de 0,02; 0,04; ppm.
0,06; 0,08 mM de DPPH (Proveedor: La prueba con los extractos se realizó con 2
SIGMA), de DPPH, en un volumen de 5ml. ml volumen final de solución inicial DPPH
Además, se preparó un blanco de etanol 0.1 mM más 50 µl de cada extracto, y sus
absoluto. diferentes diluciones (800, 600, 400,200,
Se realizó la lectura de las absorbancias a 100, 50 y 12.5 ppm). Las diluciones se
517 nm longitud de onda de las diluciones dejaron en reposo en ausencia de luz durante
en un espectrofotómetro THERMO- 30 minutos. Transcurrido este tiempo se
SCIENTIFIC. realizó la lectura de la absorbancia a 517 nm
Todo este trabajo se lo realizo en oscuridad de longitud de onda en el espectrofotómetro.
para evitar la oxidación del reactivo. Los resultados fueron expresados como
Lectura del control positivo actividad antioxidante de DPPH utilizando
Para la realización de la prueba de la siguiente fórmula (Brand-Williams) que
antioxidantes se trabajó con un control indica:
positivo de Vitamina “C” P.A. (proveedor Cálculos:
SIGMA).
Donde:
Am: Absorbancia de la mezcla de reacción (DPPH + extracto)
Abm: Absorbancia del blanco de muestra (extracto + agua)
Abm DPPH: Absorbancia de la solución de DPPH
