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Cosecha de larvas hidrato de cloral 50g y agua destilada en un
La cosecha de las larvas del primer día es al vaso precipitado en baño María hasta que
tercer día. El procedimiento se realiza tome una coloración translucida y
lavando los frascos de ovoposición con agua consistencia viscosa.
a 20ºc. Una vez lavadas las larvas de 3er Análisis de las alas
instar fueron colocadas en un tamiz para El análisis microscópico se realizó el conteo
posteriormente hacer el conteo de 100 larvas tanto de la parte dorsal como la ventral de
por vial de experimento. las alas de D. melanogaster bajo un aumento
Tratamiento de larvas de lente de 10x a 40x. En el análisis de las
Las larvas obtenidas son llevadas a un medio alas se toma en cuenta el número de
instantáneo Drosophila (Carolina biological manchas por ala. Las mutaciones se
supply). Reconstituido con diferentes diferenciaron entre: manchas simples
concentraciones de la muestra a evaluar y (tricomas flr3 o mwh); manchas pequeñas (1
también suplementando con los controles a 2 células); manchas grandes (2 o más
negativos. Los disolventes usados fueron de células) y manchas gemelas (tricomas flr3 y
la muestra; agua, etanol y tween 80. Los mwh adyacentes). Se considera solo los
frascos fueron dejados en la incubadora a sectores encontrados en las siguientes
25ºC hasta la emergencia de los adultos. Una regiones distales del ala: A, B, C, C´, D, D´y
vez ocurrido el crecimiento de las larvas se E.
realizó el conteo de sobrevivientes. Análisis estadístico de Genotoxicidad
Posteriormente se colocaron las moscas Esta prueba estadística determina si la
tratadas en etanol al 70%. Para su respectivo frecuencia de mutación que se encuentra en
análisis de las alas y posterior análisis la serie tratada difiere significativamente de
estadístico. Las alas fueron fijadas en porta lo hallado en el control, que corresponde a
objetos con la solución de faurer. la frecuencia espontanea de mutación.
Preparación de medios SMART La formulación de dos hipótesis
La preparación de medios se realiza en un alternativas permite emitir un diagnostico
vaso precipitado, se coloca 750ml de agua a estadístico, de manera que el resultado
fuego lento, en otro vaso precipitado de pueda clasificarse como positivo, débil
1000ml se mezcla la levadura con azúcar y positivo, negativo o inconcluyente. Estas
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nipazol, hasta que tenga una consistencia hipótesis son :
pastosa, en otro recipiente se disuelve harina - Hipótesis nula (H ) no hay diferencia en
0
amarilla con agua destilada de 138ml. Una la frecuencia de mutación entre el
vez que el agua empieza a burbujear se tratamiento y el control.
introduce la mezcla de levadura. - Hipótesis alternativa (H ) el tratamiento
A
Se deja hervir unos minutos removiendo la supone un incremento de m veces la
consistencia pastosa a fuego lento y se añade frecuencia de mutación comparada con la
la solución acida de 3.5ml. El medio se frecuencia esperada por mutación
vierte a los frascos hasta cubrir espontanea.
aproximadamente 2cm de la base. - Si se rechaza H 0 implica que el
Medio de experimentación tratamiento origina un incremento
La cuantificación se realizó con el medio significativo de la frecuencia de mutación.
carolina biological supply a 1.5g la cantidad - Si además se rechaza H significa que el
A
requerida del medio se colocó en los frascos de tratamiento no produce el incremento
experimentación, se agregó el extracto etanólico requerido para considerar el compuesto
a diferentes concentraciones a cada frasco. como un claro mutágeno. En este caso se
Solución Faure clasifica como mutágeno débil.
Los componentes se mezclaron de la - Por otro lado, si no se rechaza ninguna de
siguiente: goma arábiga 30g, glicerol 20ml, las dos hipótesis, los resultados se
